全国第四次大熊猫调查首次新增DNA调查法，通过提取粪便中的DNA分辨大熊猫性别，以此了解其分布及生存发展状况

　　11月的雅安市荥经县，蒙蒙雨雾，笼罩着连绵群山，一群穿着雨衣、胶鞋，打着绑腿的调查员，全神贯注地穿梭其中。

　　他们爬陡崖、趟河水、穿竹林，按U字形、Z字形路线，走遍背包里地图上的格子，风雨无阻只为寻“宝”——新鲜的大熊猫粪便。

　　从今年6月28日开始，全国第四次大熊猫调查启动，首次新增DNA调查法，通过提取粪便中的DNA分辨大熊猫性别，以此了解其分布及生存发展状况。

　　调查员的工作之一，就是收集大熊猫粪便。

　　在四川，调查工作从11月初启动，涉及省内39个县，雅安市荥经县是第一站。华西都市报记者跟随调查员翻山越岭，调查四川野外大熊猫生存现状。而调查的答案，要等到2013年才会揭晓。

　　DNA法全名“非损伤性DNA数量调查法”，10多年前就已研制出，可以分辨大熊猫的雌雄，分析“性比”，判断个体间的亲缘关系

　　“四调”结果要等到2013年，才会有清晰答案

　　最新数据是10年前的 如今大熊猫情况不明

　　王大勇是第一次参与全国大熊猫调查，在冕宁县冶勒保护区工作期间，他做过不少野外调查。

　　“‘三调’花了两年多时间，调查出我国有1596只大熊猫，光四川就有1206只。”王大勇说，这个数据是10年前的，现在四川有多少只大熊猫，生活得怎么样，没有人知道。

　　今年6月得知全国第四次大熊猫调查开展的消息后，王大勇表现出极大的兴趣，立即报名参与。他说，“虽然调查工作持续时间较长，但只有通过调查，才能了解大熊猫的生存状态。参与其中，对我个人也是锻炼。”

　　国家林业局1999年进行的“三调”数据显示，矿山、水电开发、交通建设、旅游等，对川内五大山系的大熊猫栖息地产生了不同程度的破坏。水源和竹林的破坏，直接影响到大熊猫的生存。

　　今年11月初，王大勇和调查队来到雅安市荥经县，开始为期两年半的调查工作。

　　“过去10年里，有些大熊猫栖息地植被逐渐恢复，也有地方出现新的植被破坏现象，大熊猫生存势必受到影响。”四川大学生命科学院教授冉江洪是第二次参与大熊猫调查，他说，人们对大熊猫日益增长的关注度和保护管理需要，催生了第四次大熊猫调查的开展。

　　带上干粮钻进竹林 组长把最远样线给自己

　　11月19日中午，调查荥经县晒垫坪前，黄舰和队友们来到菜市场采购干粮。他来自小河沟自然保护区，作为小组长，他负责准备整个小组调查期间的食宿。

　　一路上，他好几次伸开双臂甩动胳膊，眯起眼睛晒太阳。

　　“难得晒会儿太阳啊，半个多月都没遇到这样的天气了。”他微笑着告诉记者，调查期间，几乎每天都要翻几座山，即使有阳光，在树木密集的山林里，也只感觉到潮湿闷热。

　　土豆、白菜、饼干、面包、矿泉水……黄舰和另一名组长付强带回来几大包食物。“说不准在野外会遇到什么困难，要是食物不够，调查员的生活就成问题。”黄舰说，每天必须等到最后一个调查员回来，才能开饭。

　　第二天上午，记者和12名调查员一起前往荥经县晒垫坪，这里有41条样线。

　　“样线”就是调查员要走的格子，实际面积是2平方公里。一张4A纸大小的地图上，划分有大约90个样线。组长都把距离驻扎地最远的样线分给自己。黄舰分给自己的572号样线，要走4个小时才能到达。

　　前往晒垫坪的山路蜿蜒曲折，沿途山涧中不断有水流出，漫过只留下两道车轮痕迹的山路，缓缓渗到另一侧的山谷里。汽车在颠簸不平的山路上跑了3个多小时，在晒垫坪一个水电站，调查员们驻扎下来。

　　“这里简直就是家！”调查员吕旭下车后大喊。调查之前，他们已和水电站沟通，对方同意他们在这里借宿，并帮助做饭。

　　找路靠PDA和指南针 汗水雨水湿透了衣服

　　大熊猫调查工作艰辛又复杂，11月21日和来自广元青川毛寨保护区的李辉耀一起进山的调查经历，给我留下了深刻印象。

　　上山前，李辉耀在PDA上调出等高线地形图图层，调整指南针，发现要往西北方向走。穿过这条样线，才能达到目的地34号样线。

　　PDA是本次调查才启用的，存储着等高线地形图、GPS导航系统和调查需要填写的表格，调查员可以在PDA中记录调查数据，直接导入电脑存储。

　　前一天还是阳光灿烂，此时却下起了小雨。浓雾弥漫，看不清百米外的景象，山里的气候变化很快。我们所在地海拔1790米，34号样线距离我们所在地并不远，穿过丛林，跨过河就能到。

　　竹林丛高3米至5米，其中夹杂着一些不知名的植物，轻轻一碰，周围竹叶上的雨水哗啦啦落下，犹如一阵急雨。半个小时后，记者的绑腿已湿透，上衣沾上了一层不知名的黑色植物汁液。

　　眼前是一条宽约5米的河流。初冬的河水冰冷刺骨，没过膝盖。湍急的水流冲击着巨大的鹅卵石，鹅卵石上布满青苔，鞋底刚挨上去就滑倒。和向导一起，3个人花了10多分钟才到河对岸，鞋子、裤腿全湿了。

　　“爬过这个山梁就到了。”向导指着山坡说。从等高线地形图上看，这个山脊等高线密集，坡度较大，“目测坡度60度左右”。

　　“走吧，这已经是调查中比较容易的路线了。”看记者愣着站在河边，李辉耀把记者的行李背到自己肩上。

　　高大的云杉、冷杉和竹节上带刺的八月竹，密密麻麻，脚下是厚厚的针阔叶落叶，几乎找不到人的踪迹。下过雨的山林，到处都是露水。

　　潮湿、枯萎的树枝挡路，记者手脚并用扒开竹丛，两个多小时后，爬到海拔2330米处，汗水雨水湿透了衣服。

　　李辉耀的眼镜多次被露水模糊，他顾不得全身冰冷，仔细观察周围植被，填写了一份《大熊猫野外种群状况调查表》。

　　“树木多是针阔叶混交林，乔木和灌木均高15米，平均胸径16厘米，郁闭度0.3，生长情况较好。”担心表格装在背包里被浸湿，他又将数据在PDA中录入了一遍。

　　竹子是大熊猫的主食，所以它是植被调查中最重要的植物。这一趟调查，没有发现大熊猫活动痕迹，沿途只看到一些毛冠鹿粪便。

　　一个山坡爬半天 夜宿山野是家常便饭

　　在地势陡峭的山林做调查，如果天黑前回不到营地，就得找相对安全的悬崖过夜。夜宿山野，对调查员来说是“家常便饭”。

　　“实地环境和地图往往有差别，有些地方在地图上看很近，实际却要花很长时间才能走完。途中一定不能迷路，否则很危险。”吕旭说。

　　一星期前，他在泥巴山调查时遇上下雨，山雾很浓。返回时，听到队友黄舰喊他名字，山谷里响起接连不断的回声，吕旭分辨不出黄舰的位置，而他所在地方是横断山崖边沿。

　　穿着被雨水淋湿的衣服，吕旭在山坡上绕了很久，眼看天要黑了，还没找到平缓的下山路。听到队友的喊声，原本打算在山里过夜的他，“一下子觉得出山有希望了。”两三个小时后，吕旭找到平缓的山坡，下山却发现，黄舰就在横断山崖下面，离他听见喊声的地方大概10多米。

　　在晒垫坪调查中，调查员杨毅和队友在山野里度过了3个夜晚。山野露宿，必须在远离树木的地方生火做饭，往往是地形比较陡的石堆坡，帐篷没法铺开，队员只能用彩条布和树干搭起简易帐篷。

　　20平米不到的帐篷，“门口”是厨房，空中架起树干烤湿衣服，晚上人挨人躺在睡袋里，“半夜常被冻醒。早上起来，睡袋周围全是水。”杨毅说。

　　首次使用DNA法 检测出的结论更准确

　　今年6月，“四调”启动后在王朗自然保护区进行试点，DNA法首次作为调查方法投入使用。

　　早在2003年至2005年，科研人员在王朗自然保护区，就曾使用DNA法做过调查，结果显示，这里生存着66只大熊猫，这一数字比“三调”结果高出两倍，数据令人震惊。

　　使用DNA法，是不是意味着可以发现更多的大熊猫？王朗保护区管理局局长陈佑平说：“这是DNA法的一次试验，用于和咬节法做对比。采样力度大，调查时间长。”

　　他说，调查结果只是表明王朗自然保护区出现过66只大熊猫，是因使用不同调查方法得出的结论，“不足以说明大熊猫在此期间数量增长。”

　　中科院动物研究所博士胡义波参与了王朗自然保护区的试点。他说，“DNA法在国外已普遍使用，但国内才刚刚开始。从科学性讲，DNA法检测出的结论更准确，但采样过程太艰难，而且必须是15天以下的新鲜粪便。所以在调查中，可以和‘咬节法’辅助使用。”

　　“年龄大的大熊猫因为牙齿磨损严重，咬过的竹节宽度较大，而未成年大熊猫咬过的竹节较窄，从而可以分辨大熊猫的年龄段。由于大熊猫幼仔以吃竹叶为主，粪便中很难找到咬节，所以幼年大熊猫往往不在咬节法统计范围之内。”西华师范大学生命科学学院副教授杨志松说，熊猫研究泰斗胡锦矗就是依此发明了“咬节法”。

　　熊猫粪便全是“宝” 藏着国宝的DNA

　　11月23日下午，调查队员回到营地，罗春平从荥经县安靖乡大风水带回的大熊猫粪便比较新鲜，用透明塑料袋包裹得严严实实。

　　此次调查中，他已是第4次收集到新鲜的大熊猫粪便。

　　“粪便完整，光泽不明显，应该有7天时间了。”罗春平说，20日调查荥经县139号样线前，当地村民告诉他，很久都没在山上看到大熊猫了，并且劝他不要冒险爬山。但罗春平执意上山，“这里以前发现过大熊猫。”

　　在海拔2140米的坪上，生长着密集的冷箭竹。罗春平发现竹子上有大熊猫咬过后留下的竹茬，沿着有竹茬的竹丛往里走，大约半个小时后，他发现“100多平米的地方，至少有30坨大熊猫粪便”。通过观察粪便的成份和结构，罗春平确定这些粪便是同一只大熊猫的。他包了3团粪便，下山后冷藏在村民家的冰箱里。

　　DNA取样辨雌雄 大熊猫有了“身份证”

　　DNA法全名为“非损伤性DNA数量调查法”，早在10多年前就已研制出，但受当时条件限制，没能投入使用。

　　川大生命科学院教授冉江洪介绍，“通过检测DNA，可以分辨大熊猫的雌雄，这样就能分析它们的‘性比’，判断个体间的亲缘关系。”通过分析“性比”，能了解大熊猫种群的发展趋势。

　　罗春平带回来的大熊猫粪便，经酒精浸泡，溶解后可以看到一节节网状细丝。“它吃的是竹笋，而且咀嚼得很细。”罗春平说。

　　10多分钟后，工作人员将收集到的一瓶250毫升的脱洗液冷藏在冰箱中。调查结束后，收集到的所有脱洗液，都将送往中科院动物研究所进行DNA提取。

　　“在野外调查，见到大熊猫的机会很小。通过分析粪便，确定大熊猫数量成为比较可靠的办法。粪便最外层沾有肠道脱落细胞，溶解的液体用来提取DNA进行分析，每一组DNA分子探针，就是一只大熊猫的‘身份证’，同时能成为它的遗传档案。”冉江洪说。

　　地震是否影响大熊猫遗传 国宝总数能否刷新后年揭晓

　　虽然地震后并没有发现野生大熊猫因灾死亡，但这并不意味着它们的生存环境未受影响。去年9月，省林业厅发布消息，因为大熊猫栖息地毁损37.17%，分布有35只野生大熊猫的岷山B种群大熊猫的生存空间缩小，栖息地破碎化程度大大增加，可能加剧其遗传衰退。

　　“震后灾区一直在进行植被恢复工作，有些地方植被恢复较好，但汛期发生地质灾害，又造成新的破坏。”冉江洪说，明年将前往灾区调查，力度会较大。植被的恢复、竹林生长态势、是否会开花，都将在评估范围内，并以此判断大熊猫生存环境变化，同时评估是否继续进行人为恢复植被活动。

　　截至11月19日，调查队员在33条样线中

　　发现了大熊猫粪便，收集DNA样品现在全部冷藏。等到数据收集结束后，将送往中科院动物研究所提取DNA，进行微卫星基因分型，在此基础上完成个体鉴定分析。

　　“三调”数据是否将被刷新、大熊猫生存发展趋势究竟如何，2013年的调查结果，将给出清晰的答案。

　　相关链接

　　一至四次全国大熊猫调查数据

　　（注：不含大熊猫幼体数量）

　　“一调”

　　1974年-1977年全国大熊猫数量2459只

　　“二调”

　　1985年-1988年全国大熊猫数量1114只

　　“三调”

　　1999年-2003年全国大熊猫数量1596只

　　“四调”

　　2011年-2013年

　　调查范围涉及四川、陕西和甘肃3省16个地（市、州）53个县（市、区），野外调查面积超过320万公顷。四川省调查范围包括，岷山、邛崃山、凉山、大相岭和小相岭的39个大熊猫分布县（市、区），覆盖总面积超过250万公顷。

　　华西都市报记者侯婷婷摄影报道

　　调查员处理大熊猫粪便